´º½Ú¼ÙÆÚ½«ÖÁ£¬¹ØÓÚ¿ÆÑÐÈËÀ´ËÃ÷ÈÕâ¿ÉÊÇÓÖ°®ÓÖºÞ£ºÒ»¸ö¼ÙÆÚ»ØÀ´£¬Ô±¾ÉúÁú»î»¢µÄϸ°û˲¼ä¡°±©±Ð¡±¡£
ÄÇôµ¼ÖÂÕâÖÖÇé¿öµÄÔÒòÓÐÄÄЩ£¿
½ÚÇ°Ñøϸ°ûÀú³Ì¸Ã×¢Òâʲô£¿
NEST°ïÄã»®Öص㣡
°ïϸ°ûáÌá̹ýÁúÄ꣡
01ϸ°ûÇ°ÆÚ×¼±¸
ϸ°ûÅàÑøÌåϵÖÐ×îΪÖØÒªµÄ¼´ÎªÏ¸°ûÅàÑø»ù¡£³£¼ûµÄϸ°ûÅàÑøÒªÁì¼´ÊÇ90%»ù´¡ÅàÑø»ù£¨DMEM¡¢1640¡¢F12µÈ£©+10%̥ţѪÇå¡£
¾¡¹ÜʹÓù㷺£¬µ«Ì¥Å£ÑªÇåÔÚϸ°ûÅàÑøÖÐÃæÁÙ×ÅÖî¶àÎÊÌâºÍΣº¦¡£ÓÐÑо¿·¢Ã÷ÅàÑø»ùÖ§ÔÌåÎÛȾÖеÄÅ£À³ÊÏÎÞµ¨çÞÔÌåºÍ¾«°±ËáÖ§ÔÌåÀ´Ô´ÓÚţѪÇå¡£
Òò´Ë£¬Ì¥Å£ÑªÇåµÄƱðÀëÁ¹ØÖØÒª¡£
NESTÑ¡ÓÃÄÏÃÀÎÚÀ¹çѪԴ£¬Ã¿Ò»ÅúѪÇåµÄÉú²ú¶¼Êܵ½ÑϸñµÄ¿ØÖÆ£¬´ÓѪÇåµÄÊÕ¼¯ºÍÕû¸ö´¦ÀíºÍÉú²úµÄËùÓн׶Σ¬Æ¾¾ÝÇкÏÅ·ÖÞ¹æÔò½øÐд¦Àí£¬Ò»Ö±µ½×îÖÕ°ü×°×öµ½È«³ÌµÄÖÊÁ¿¿ØÖÆ¡£
NEST̥ţѪÇåѪԴµØÖ¤Ã÷
NEST̥ţѪÇåÎÞÒß²¡Ö¤Ã÷
NEST̥ţѪÇå¹Ù·½Ô²úµØÖ¤Ã÷
±ðµÄ£¬NESTÿһÅúѪÇ嶼»á½øÐÐÍêÉƵļì²â¡£
1. Ö§ÔÌ壺ÿ²úÆ·Åú´Î¶¼Òª¼ì²âÓÐÎÞÖ§ÔÌ塣ͨ¹ýÅàÑøÒªÁì¼ì²âѪÇåÊÇ·ñ±£´æÖ§ÔÌå¡£
2. ÎÞ¾úÐÔ£º²úÆ·¾ù»ùÓÚÅ·ÖÞÒ©µä»òÃÀ¹úÒ©µä½øÐÐÎÞ¾úÐÔ¼ì²â£¬È·±£ÎÞϸ¾ú¡¢½Íĸ¡¢´ó³¦¸Ë¾úÊɾúÌåµÈ¡£ÎÞ¾ú¹ýÂË¡¢ÎÞ¾ú·Ö×°£¬Ã¿Éú²úÅú´ÎÖоù»á³éÑù½øÐÐÎÞ¾ú²âÊÔ¡£
3. ѪºìÂÑ°×£ºÑªºìÂÑ°×¾ßÓÐÑõ»¯ÐÔ£¬¹ý¸ß»áµ¼ÖÂϸ°ûÊÜËð¡£½ÓÄÉ·Ö¹â¹â¶È¼ÆÕÉÁ¿²ÐÁôѪºìÂÑ°×ˮƽ¡£
4. ϸ°ûÅàÑøÊÔÑ飺ÿÅú̥ţѪÇ嶼±»²âÊÔÌض¨Ï¸°ûϵµÄÌåÍâÅàÑøЧ¹û¡£´Óϸ°ûÉú³¤¡¢ÆÌ°åЧÂÊ¡¢¿Ë¡ЧÂÊÈý·½ÃæÆÀÅС£²âÊÔϸ°ûÖÖÀࣺHeLa£¬L929£¬SP2/0-AG14£¬MRC-5
Ñ¡ÓÃÖ¸ÄÏ
02ϸ°û¶³´æ²Ù×÷
ϸ°û¶³´æÊǽ«Ï¸°û·ÅÔÚµÍÎÂÇé¿ö£¬¼õÉÙϸ°û´úл£¬ÒÔ±ãºã¾ÃÖü´æµÄÒ»ÖÖ¼¼Êõ¡£
¶³´æ¹ÜÒ»°ãÓÃ×÷µÍÎÂÖü´æ£¬Êdz£ÓõÄʵÑéºÄ²Ä£¬¶àÓÃÓÚÉúÎï¡¢Ò½Ò©¡¢Ê³Æ·µÈÐÐÒµ¡£½ÓÄÉÒ½Óþ۱ûÏ©(PP)ΪÔÁÏ£¬ÔÚÒºµªÆøÏàµÄ³¬µÍÎÂÇé¿öÏÂ,¿ÉÄ͵ÍÎÂÖÁÁãÏÂ196¡æ¡£
ÄϹ¬28¶³´æ¹Ü·ÖͨÀýÎÞÂ붳´æ¹Ü¡¢¶þάÂ붳´æ¹ÜºÍÈýÂëºÏÒ»SBS¶³´æ¹ÜÈýÖÖϵÁУ¬¾ß±¸ÍêÕûµÄÎȶ¨ÐÔÓëÄþ¾²ÐÔÑéÖ¤±¨¸æ¡£
ϸ°ûÔÚ²»¼ÓÈκα£»¤¼ÁµÄÇé¿öÏÂÀ䶳£¬Ï¸°ûÄÚÍâµÄË®·Ö»áºÜ¿ìÐγɱù¾§´Ó¶øÒý·¢Ò»ÏµÁеIJ»Á¼·´Ó¦¡£
Òò´Ë£¬Ï¸°û¶³´æÒºÖÁ¹ØÖØÒª¡£
NESTϸ°û¶³´æÒº¸ÄÁ¼ÓÅÊÆ
Ñ¡ÓÃÖ¸ÄÏ
ϸ°û¶³´æ²Ù×÷Ö¸ÄÏ£¨ÅÅ°æµÄʱºòʹÓÃÉÏÏ»¬¶¯¼ì²ìÎÄ×ÖµÄÄ£°å£©
1. Ìù±Úϸ°ûÖƱ¸Ï¸°ûÐüÒº£º(Ðü¸¡Ï¸°ûÇëºöÂÔ´Ë°ì·¨)
(1) ½«¾ÉÅàÑø»ùÎü³ý,ÓÃPBSÇåÏ´Á½±é¡£
(2) ÔÚÅàÑøÆ¿ÖмÓÈëÉÙÐíÒÈø,ÒÔÄܸ²ÂúÆ¿µ×ΪÏÞ¡£½«ÅàÑøƿƽÖÃÓÚÅàÑøÏäÖÐÏû»¯Ô¼1~2·ÖÖÓ,ÆÚ¼äÔÚÏÔ΢¾µÏÂÊÓ²ì,Ò»µ©·¢Ã÷ϸ°û¼ä϶Ôö´ó¡¢Ï¸°û±äÔ²¡¢±È½ÏËɶ¯ºó,Á¢¼´ÖÕÖ¹Ïû»¯(¸öÌåÄÑÏû»¯Ï¸°ûÐèÒªÑÓ³¤Ïû»¯Ê±¼ä,µ«ÒªÖÆÖ¹Ïû»¯Ì«¹ý)¡£
(3) ¼ÓÈëÊÊÁ¿ÎÂÔ¡ºÃµÄÍêÈ«ÅàÑø»ùÖÕÖ¹Ïû»¯,ÇáÇá×àÀÖ¾ùÔÈϸ°û¡£
2. Ìù±Úϸ°ûºÍÐü¸¡Ï¸°ûµÄ¶³´æ£º
(1) È¡ÉÙÁ¿Ï¸°ûÐüҺϸ°û¼ÆÊý,Ëã³öϸ°û×ÜÊýºÍËùÐèϸ°û¶³´æÒºµÄÁ¿¡£Ï¸°ûµÄ¶³´æÃܶÈÒÔ1¡Á10^6~2¡Á10^7 cells/ mLΪÒË¡£
(2) ½«ËùÐèÁ¿µÄϸ°ûÐüҺתÒÆÖÁÊʵ±ÀëÐĹÜÖÐ,200~500¡Ág,ÀëÐÄ3-5·ÖÖÓ, ÆúÉÏÇåÊÕ¼¯Ï¸°û¡££¨ÀëÐÄËٶȺÍʱ¼äÈ¡¾öÓÚϸ°ûÀàÐÍ£©
(3) Ïòϸ°û³ÁµíÖмÓÈëÊÊÁ¿ÎÞѪÇå·Ç³ÌÐòϸ°û¶³´æÒº,ÓÃÒÆÒºÆ÷ÇáÇá×àÀÖÒÔÖØÐüϸ°û,·Ö×°ÓÚÎÞ¾úϸ°û¶³´æ¹ÜÖÐ,ÑÏÃÜ·â¿Úºó,×¢Ã÷ϸ°ûÃû³Æ¡¢´úÊý¡¢ÈÕÆÚ¡£
(4) Ö±½ÓÖÃÓÚ-80¡æ±ùÏäÖÐÖü´æ,ϸ°û¿ÉÖÁÉÙÉú´æÒ»Äê;»òÕß-80¡æÁôËÞºó,Ô½ÈÕ½«Ï¸°ûͶÈëÒºµªÖкã¾ÃÖü´æ¡£
03ϸ°ûËÕÐѲÙ×÷
1. ×ÔÒºµª¹Þ»ò-80¡æ±ùÏäÖÐÈ¡³ö¶³´æ¹Ü,¼ì²é¸Ç×ÓÊÇ·ñÐý½ô,Á¢¼´·ÅÈë37¡æˮԡÖпìËٽⶳ¡£(ÖÆÖ¹±ù¾§ÖØнᾧ¶øÔì³Éϸ°ûËÀÍö),ÇáÒ¡¶³´æ¹ÜʹÆäÔÚ1~2·ÖÖÓÄÚÈ«²¿ÈÚ»¯,ÒÔ75%¾Æ¾«²ÁÊö³´æ¹ÜÍⲿ,ÒÆÈëÎÞ¾ú²Ù×÷̨ÄÚ¡£
2. ½«½â¶³µÄϸ°ûÐüÒºÒÆÖÁ15mLÎÞ¾úÀëÐĹÜÖÐ,ÔÙ¼ÓÈë5~10mLÔ¤ÈȺõÄÍêÈ«ÅàÑø»ù,ÇáÇá»ìÏý¾ùÔÈ,200~500¡Ág,ÀëÐÄ3-5·ÖÖÓ,ÆúÉÏÇåÊÕ¼¯Ï¸°û¡£(ÀëÐÄËٶȺÍʱ¼äÈ¡¾öÓÚϸ°ûÀàÐÍ)
3. ¼ÓÈëÔ¤ÈȺõÄÍêÈ«ÅàÑø»ù,»ìÏý¾ùÔÈ,תÒƵ½Ï¸°ûÅàÑøÃó»òÅàÑøÆ¿ÖÐ,ÖÃÓÚϸ°ûÅàÑøÏäÖÐÅàÑø¡£
×¢£º¿ÉʹÓÃÄϹ¬28ÐÂÍƳöϸ°ûËÕÐÑÒÇÌæ´úÔʼϸ°ûËÕÐÑÀú³Ì£¬Ô¤ÈÈ1·ÖÖÓ£¬´ßÈڽ׶Î1·Ö10Ãë×óÓÒ£¬½â¶³ËÕÐѽ׶ÎԼĪ1·Ö20Ãë×óÓÒ£¬½â¶³ËÕÐѺóϸ°û´æ»îÂʸߡ£