1. 什么情况下需要使用不含酚红的GelNest?基质胶?
关于涉及颜色检测的实验,推荐使用不含酚红的GelNest?基质胶,如使用荧光染料对内皮细胞成管的定量;
对子宫内膜细胞培养必须使用不含酚红的GelNest?基质胶。
不含酚红的GelNest?基质胶也可以应用于一些体内应用研究。因酚红与一些非甾体雌激素结构相似,有显著的雌激素活性,在实验动物体内可能具有滋扰内排泄与荷尔蒙代谢的能力。别的,酚红是一种潜在的内排泄滋扰物,有可能会滋扰实验动物体内激素的自然爆发和代谢能力。
2. 高浓度GelNest?基质胶可以用于哪些实验?
高浓度GelNest?基质胶可用于3D细胞培养、裸鼠体内成瘤实验等体内应用研究。高浓度GelNest?基质胶的卵白浓度高,和肿瘤细胞一起皮下注射到小鼠体内后坚持其完整性并坚持原位,以便进行原位剖析或未来肿瘤的取样。
3. 哪些情况下应该选用薄胶法/厚胶法?3D细胞培养有哪些应用?
薄胶法主要用于细胞贴壁和增殖,如原代细胞培养仅需要一层薄薄的卵白层辅助而非卵白基质;
厚胶法主要用于3D细胞培养,成环试验,如大鼠主动脉组织剖析为毛细管样结构,以及进行细胞侵袭实验等。
3D细胞培养实验,主要是用于研究细胞与细胞间的相互作用以及庞大结构等。
4. GelNest?基质胶可以用于诱导ES/iPS细胞剖析的研究吗?
可以,实验标明GelNest?基质胶可以用于ES/iPS细胞的剖析研究,建议使用干细胞专用的GelNest?基质胶。
5. 如何从GelNest?基质胶中收获细胞?
推荐使用中性卵白酶,如疏散酶来收获培养在GelNest?基质胶中的细胞。
中性卵白酶相比胰卵白酶、胶原卵白酶或其它卵白水解酶能够更温和有效地获得单细胞悬液,不会损伤细胞或破裂细胞外貌卵白。关于需要继续接种培养或生物检测的细胞,使用中性卵白酶不会爆发损伤,别的中性卵白酶也可以用于组织的疏散。
也可使用相应的细胞苏醒溶液进行代谢实验和RNA接纳实验,建议在4℃使用细胞苏醒溶液进行非酶反应的细胞收获。
其它要领:降低温度至4-6℃使基质胶解聚,这需要一定的时间并且仅适合一部分应用;或者离心以破坏基质胶结构。
6. 使用GelNest?基质胶培养的细胞,如果需要进行切片或者免疫组织化学及免疫荧光检验,该怎样牢固呢?如何制止解聚?
可以使用2-4%多聚甲醛进行牢固,如2-4%多聚甲醛配制在PBS中,室温牢固20分钟。某些情况下,在牢固后可能泛起解聚的情况,可以加入1%戊二醛(戊二醛作为牢固剂,常用于电镜检测)。
如果需要进行免疫荧光检验,加入戊二醛后,会泛起明显的配景荧光。为了解决这一问题,建议操作中在牢固之后,使用NaBH4进行淬灭。NaBH4极易起泡,进行该办法时,必须在水平操作台上小心操作,制止晃动,尽量减少气泡的形成。另外,也可以实验使用较低浓度(如0.1%到0.5%)的戊二醛进行牢固,浓度越低,配景荧光信号越少。
7. 提取历程会引起层粘连卵白变性吗?
不会引起层粘连卵白变性。
注:NEST提供的种种基质胶应用计划仅供参考,实际须凭据实验目的进行条件的优化。