间充质干细胞属于成体干细胞，可在体外通过差别的要领干预下下诱导剖析为骨、软骨及其他结缔组织，因其来源广泛，疏散无创伤，较低的免疫原性、生长周期短等特点，是组织工程种子细胞的重要来源。干细胞的诱导剖析一方面是干细胞鉴定的主要要领，另一方面也是干细胞功效学研究的主要途径。接纳体外条件培养基诱导培养下，人间充质干细胞应能够剖析为成脂肪、骨、软骨细胞。成骨剖析经茜素红染色法鉴定。
实验前准备：
试剂：PBS，成骨诱导剖析培养基，茜素红
耗材：NEST细胞培养皿，NEST普通吸头，NEST微量离心管
设备：CO2培养箱，显微镜
一、接种骨髓间充质干细胞：
取对数生恒久的细胞，凭据2×105cells/cm2的细胞密度接种至包被后的细胞培养皿中，将接种好的细胞培养皿放到37℃，5% CO2细胞培养箱培养，按期视察细胞增殖状态，当细胞融合度达60-70%时，弃掉上清，加入成骨诱导剖析培养基。
二、细胞剖析诱导：
每2-3天进行换液（按期视察是否有污染），再放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养约2-3周，并注意视察细胞形态变革。凭据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的时间，进行下一步染色鉴定。
三、细胞牢固：
用吸头（确保吸取充分）吸去培养基使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液细胞培养皿底面，室温固30-60min，弃去牢固液再使用1×PBS清洗两次。
四、茜素红染色：
加入适量茜素红染液染3-5min，吸去茜素红染液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1×PBS制止细胞干燥。
五、诱导评估：
显微镜下视察成骨染色效果，并进行图像收罗和诱导评估。诱导乐成时，钙质结节会与茜素红染料结合后泛起红色或橘红色。
图c 间充质干细胞成骨诱导剖析,茜素红染色显示钙结节..
