实验质料：
基础培养基
血清（通例为FBS/NBS）
电动移液枪
移液管[NEST]
无冰冰盒[NEST]
T25培养瓶[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
100mm细胞培养皿[NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
不可忘记的准备：
1.记得一定要预定干冰�。。〔蝗荒阆赴〕隼纯擅坏胤酱�，要是液氮罐距离实验室远点，你的细胞可能就没了。
2.用来转移细胞的无冰冰盒一定要灭菌�。。∷淙�，如果条件刻苦点的泡沫盒，也不要偷懒，无论什么装载容器，都要提前灭菌，可以有效规避污染危害。
3.水浴锅提前预热至37℃。
4.培养基预热至37℃。
要开始了�。ㄇ煤诎澹�
1.在生物样本库中搜寻到目标细胞,在液氮罐找到对应的细胞，放入预先准备好的无冰冰盒（容器）内。冰盒内装有碎干冰，冰芯的铝合金外壳协同高导热的合金� ？�，确保样品能快速冷却，孔之间的温度差别小于0.1℃，能很好的维持样品间的温度一致性。
2.在细胞进入水浴锅解冻前，务必将冻存管竖直立在桌面上10~20s，这样之后，可能排空保存在冻存管盖漏洞内的液氮。尤其是外旋盖的冻存管，特别要注意！不然在水浴解冻的时候有概率会砰的一声爆发出来！极为危险。
3.将冻存管在37℃水浴锅内水浴解冻，因为DMSO在常温情况下对细胞有毒副作用，若解冻时间过长，会导致细胞损伤并影响其存活率，所以一定要快，解冻历程在1~2min内完成。
4.解冻完成后，在生物宁静柜内，用自动旋盖机翻开冻存管，之后在移液枪将冻存管内细胞复悬，然后将细胞悬液转移至含有5~10ml培养基的离心管中，1000rmp离心5min（凭据各自细胞的特新调解离心力和离心时间）。如果没有培养基稀释，在离心历程中较高浓度的DMSO会对细胞损伤，影响活存活率！
5.抛弃上清，里面另有DMSO和死去细胞的裂解产品，这不是我们所需要的。将剩余的细胞用培养基稀释复悬，稀释比例为1:10~1:15，再凭据各人各自实验需求，分装到100mm培养皿或者T25瓶中，显微镜视察细胞状态，然后转移至细胞培养箱中培养。
苏醒后的注意点：
苏醒后记得每天都要视察细胞状态，实时更换培养基，确保细胞所需营养的富足和生长情况的清洁。
使用到的NEST产品：
移液管[NEST]
无冰冰盒[NEST]
T25培养瓶[NEST]
自动旋盖机[NEST]
盒装无菌吸头[NEST]
100mm细胞培养皿[NEST]
15mL、50mL无菌离心管[NEST]
