界说：
动物细胞融合是指两个或者多个动物细胞结合形成一个细胞的历程 。融合后形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交瘤细胞 。
动物细胞融合通常有物理法（电刺激）、化学法（聚乙二醇）、生物法（灭活病毒）三种要领 。
而杂交瘤细胞是由经免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合而成的，既有无限增殖能力又能爆发特定抗体能力的细胞 。
实验质料：
DMEM高糖培养基
FBS/NBS
生物宁静柜
灭菌手术剪刀、镊子
HAT或HT选择培养基
CO2细胞培养箱
双抗（青链霉素混淆液）
低速离心机
15mL、50mL无菌离心管
96孔细胞培养板
100mm细胞培养皿
单通道移液枪、多通道移液枪
200μL、1000μL吸头
倒置相差显微镜
220目（70μm）细胞筛
5mL一次性无菌注射器
实验准备：
饲养细胞：
融合前一天，取切合免疫质控标准的Balb/c小鼠，脱颈正法并泡在75%酒精中消毒 。
用手术剪刀轻轻剪开老鼠的腹部皮肤 。（注意请勿破坏小鼠的腹膜）
取10mL DMEM培养基在50mL无菌离心管中， 5mL注射器吸取3~5mL培养基，用手术镊子提起小鼠腹膜，将5ml培养基打入老鼠腹部，重复奏乐3-4次后将培养基接纳，置于50ml无菌离心管中 。再次吸取5ml培养基，重复此办法 。
在无菌条件下取出小鼠脾脏，用研磨器研磨脾脏，与DMEM混淆过筛网制成单个脾细胞悬液，再与腹腔细胞悬液混淆，低速离心（1000rpm*10min），弃上清 。
使用HAT培养基重悬，制成饲养细胞悬液，可凭据105/孔使用，均匀铺96孔板，每孔100μL 。（在制备历程中严格包管无菌）
SP2/0准备：
SP2/0细胞在融合前4—5天苏醒，培养换液，使细胞在融合前状态良好且处于对数增恒久 。
试剂准备：
取1mL/管50% PEG1450一支，DMEM，FBS-DMEM，FBS-DMEM(HAT)等试剂，均预热置37℃
实验流程：
SP2/0收集：
SP2/0低速离心（1000rpm*5min），弃上清，用DMEM复悬清洗，再重复一次此办法，37℃复悬备用 。
脾细胞悬液制备：
取免疫完成的小鼠，眼球取血后，浸润在75%的酒精中消毒灭菌 。在无菌条件下取出其脾脏，使用研磨器研磨脾脏，与DMEM混淆过筛网制成单个脾细胞悬液，低速离心（1000rpm*10min），弃上清，用DMEM清洗并再一次重复此办法，37℃复悬备用 。
细胞融合：
将脾细胞和SP2/0凭据[脾细胞：SP2/0 = 2:1~3:1]的比例，混淆于50ml离心管中低速离心（1000rpm*10min），弃上清且确保管内无液体残留，将细胞团块轻轻敲散，使脾细胞
& SP2/0在管底均匀混淆铺开 。加入预热完成的50% PEG1450 ，在1min内逐滴均匀加入，加完后37℃反应1min，反应完成后加入10~15ml左右终止液（DMEM）终止反应，由慢至快逐步滴加，10min全部加入完成 。
融合铺板：
细胞融合完成后，低速离心（1000rpm*10min），弃上清，使用FBS-DMEM(HAT)复悬细胞制成细胞悬液，（历程中注意行动轻柔，不可用力奏乐，以免破坏融合细胞降低融合率） 。将提前一天已加入饲养细胞的细胞培养板取出，用吸头将板内培养基上清全部吸出抛弃，将刚制备完成的细胞悬液加入96孔培养板中，每孔200μL，转入5% CO2恒温培养箱中培养视察 。
融合换液：
融合细胞在FBS-DMEM(HAT)中培养3~7天，凭据细胞融合情况，将培养上清吸出抛弃，更换成FBS-DMEM(HT)，每孔200μL �；灰汉笫硬煜赴翁�，凭据细胞生长情况，在4~7天后用Elisa进行融合阳性筛选检测 。
使用到的NEST产品：
15mL、50mL无菌离心管
96孔细胞培养板
100mm细胞培养皿
220目（70μm）细胞筛
200μL、1000μL吸头
